導(dǎo)語：糖尿病血管細(xì)胞核增殖分析論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

論文關(guān)鍵詞糖尿病足中醫(yī)證型脛后動脈血管細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原臨床研究

論文摘要目的：探討糖尿病足中醫(yī)辨證分型與血管細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原的表達差異。方法：對32例截肢的糖尿病足患者按中醫(yī)辨證分為氣血兩虛瘀阻證、脈絡(luò)瘀熱證、脈絡(luò)熱毒證和氣陰兩虛瘀阻證，分別對其截肢肢體的脛后動脈應(yīng)用免疫組化法對細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原（Ki67）的表達進行觀察、分析。結(jié)果：Ki67的陽性表達與糖尿病足動脈硬化閉塞程度呈負(fù)相關(guān)，與血管炎癥病變程度呈正相關(guān)。結(jié)論：炎癥在糖尿癥的大血管病變的過程中起到了重要的作用。

糠尿病足是糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥，據(jù)統(tǒng)計1996年全球糖尿病患者1．2億，預(yù)計到2025年，將達到2．5億以上，而大約15％的糖尿病患者將在其生活的某一時間發(fā)生足潰瘍或壞疽[1]。目前對于糖尿病足病因及發(fā)病機制雖然還不是完全清楚，但大家公認(rèn)糖尿病合并大血管病變導(dǎo)致動脈粥樣硬化是糖尿病足發(fā)病的最主要因素?，F(xiàn)將2004年10月～2005年5月間我們收治的32例糖尿病足患者的截肢動脈標(biāo)本的血管細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原(Ki67)與其中醫(yī)辨證分型的相關(guān)性研究情況報告如下。

1臨床資料

1．1一般資料：32例均為天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院和天津中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院2004年10月～2005年5月間的住院患者，其中男性24例，女性8例；年齡50～86歲，平均年齡69．2歲；糖尿病病程最長30年，最短6年，平均18±2．4年。

1．2診斷標(biāo)準(zhǔn)：糖尿病足的診斷標(biāo)準(zhǔn)采用2000年中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)會第二屆糖尿病足會議所制訂的“糖尿病足(肢端壞疽)檢查方法及診斷標(biāo)準(zhǔn)”。

1．3截肢標(biāo)準(zhǔn)：參照國際糖尿病足工作組編寫的《糖尿病足國際共識》中關(guān)于“大截肢的定義、標(biāo)準(zhǔn)和指標(biāo)”[2]執(zhí)行。

1．4中醫(yī)辨證分型標(biāo)準(zhǔn)：參照《中醫(yī)外科學(xué)(第七版)》及《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則·脫疽》之中醫(yī)辨證分型方案分為氣陰兩虛瘀阻證、脈絡(luò)瘀熱證、氣血兩虛瘀阻證、脈絡(luò)熱毒證四型。

2觀察方法

2．1標(biāo)本取材：壞疽截肢標(biāo)本32例，其中按中醫(yī)辨證分型氣血兩虛瘀阻組10例，脈絡(luò)瘀熱組10例，氣陰兩虛瘀阻組4例，脈絡(luò)熱毒組8例，取各例標(biāo)本下肢脛后動脈。標(biāo)本經(jīng)過10％福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，備用。

2．2設(shè)備、試劑：美國PENGUIN-600CL自動圖像分析系統(tǒng)，細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原(Ki67)抗體PV9000試劑盒DAB購于北京中山生物技術(shù)有限公司。

2．3免疫組織化學(xué)法：標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，采用PV法進行免疫組化染色，染色過程嚴(yán)格按試劑盒染色程序進行，選取已知的陽性切片作陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。觀察細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原(Ki67)，陽性物質(zhì)呈棕黃色細(xì)顆粒狀于細(xì)胞核表達，采用美國PENGUIN-600CL圖像分析系統(tǒng)進行圖像分析，選取病變處每500個細(xì)胞Ki67的陽性表達率作為其陽性表達指數(shù)。統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS10．0軟件包進行方差分析。

3結(jié)果

3．1中醫(yī)各證型所占比例以及年齡、性別分布：各證型比例，氣血兩虛瘀阻組10例（31．25%），脈絡(luò)瘀熱組10

例（31．25%），氣陰兩虛瘀阻組4例（12．5%），脈絡(luò)熱毒組8例（25．0%）。年齡、性別分布情況，見表1。

表132例患者年齡、性別分布n（%）

性別n50~60歲61~70歲71~80歲80歲以上男24（75．0）4（12．5）8（25．0）11（34．4）1（3．1）女8（25．0）1（3．1）3（9．3）4（12．5）0總計32（100．0）5（15．6）11（34．4）15（46．9）1（3．1）3．2免疫組織化學(xué)法觀察各證型Ki67表達差異：具體情況見表2。

表2各證型Ki67陽性表達指數(shù)比較（%）

證型Ki67陽性表達指數(shù)脈絡(luò)熱毒4．87±1．01*氣陰兩虛瘀阻1．86±0．47脈絡(luò)瘀熱1．49±0．13氣血兩虛瘀阻0．30±0．18注：與氣血兩虛瘀阻型比較，*P<0．05。

氣血兩虛瘀阻證、脈絡(luò)熱毒證、脈絡(luò)瘀熱證、氣陰兩虛瘀阻證中均可見部分細(xì)胞Ki67呈陽性表達，在脈絡(luò)熱毒證中表達指數(shù)最高，氣血兩虛瘀阻證中表達指數(shù)最低，二者比較具有顯著性差異(P<0．05)。

4討論

Ki67抗原為細(xì)胞核內(nèi)與細(xì)胞分裂增殖相關(guān)的蛋白抗原，分子量為345kd和395kd，其編碼基因位于第10號染色體上。Ki67的表達出現(xiàn)于G1中期到晚期，S期和G2期逐漸增加，有絲分裂期達高峰，分裂后迅速降解或丟失抗原決定簇，到G0期則不表達，半衰期為lh或更短[3]。有人認(rèn)為它可能是具有蛋白結(jié)合特性的重要結(jié)構(gòu)，在有絲分裂中起著維持DNA規(guī)則結(jié)構(gòu)的重要作用[4]，是一個反映細(xì)胞增殖的敏感指標(biāo)。

在糖尿病足的不同辨證分型中氣血兩虛瘀阻證、脈絡(luò)熱毒證、脈絡(luò)瘀熱證、氣陰兩虛瘀阻證中Ki67表達均呈陽性，在脈絡(luò)熱毒證中表達最強、氣血兩虛瘀阻證中表達最弱，二者相比具有顯著性差異(P＜0．05)。根據(jù)Ki67陽性指數(shù)可以判斷細(xì)胞增殖的活性，指明細(xì)胞增殖與糖尿病足動脈病變的關(guān)系。在糖尿病足的不同辨證分型中動脈的硬化閉塞程度由輕到重依次是脈絡(luò)熱毒證、氣陰兩虛瘀阻證、脈絡(luò)瘀熱證、氣血兩虛瘀阻證。Ki67的陽性表達與糖尿病足動脈硬化閉塞程度呈負(fù)相關(guān)。而在通過對32例糖尿病足截肢的動脈進行病理學(xué)觀察的過程中發(fā)現(xiàn)糖尿病足血管病變主要體現(xiàn)在中動脈的病理學(xué)變化，其中脈絡(luò)熱毒、氣陰兩虛瘀阻兩證型以動脈周圍及全層的炎癥性改變?yōu)橹?；脈絡(luò)瘀熱、氣血兩虛瘀阻證以中膜鈣化、平滑肌細(xì)胞萎縮、變性、壞死及膠原纖維增多及內(nèi)膜粥樣斑塊形成為主，炎癥表現(xiàn)不明顯；而Ki67的陽性指數(shù)與血管炎癥病變程度呈正相關(guān)。這說明炎癥在糖尿病的大血管病變的過程中起了重要的作用，特別是在脈絡(luò)熱毒證、氣陰兩虛瘀阻證兩型，這對臨床具有重要的指導(dǎo)意義。

5參考文獻

1BoultonAJ.Thediabeticfoot：aglobalview.DiabetelMetabResRev，2000，16(1)：2．

2許樟榮，敬華．糖尿病足國際共識．中華糖尿病學(xué)會第二屆足病第一次足病研討會．2002，435．

3SchulterC，DuchrowM,WohlenbergC,etal．MolecularcloingofthecellproliferationassociatednuclearantigendefinedbyantibodyKi67：anuniquegeneencodingforanew，PESTprotein.CellBiol，1993，123(3)：513.

4NamitaS，PeterA．Ki67structurefunctionandnewantibodies.Pathol，1992，168：161．